液相色譜柱的正相柱和反相柱使用方法介紹
更新時(shí)間:2016-11-12
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液相色譜柱是運(yùn)用于色譜儀系統(tǒng)中起著分離作用的儀器,是色譜儀分析系統(tǒng)的核心部件,色譜柱柱效的高低影響著檢測(cè)速率的快慢以及檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。對(duì)色譜柱的要求是柱效高、選擇性好,分析速度快。色譜柱的性質(zhì)(粒度、粒徑分布等)、填充料、柱長(zhǎng)、固定相和流動(dòng)相的種類(lèi)等都是影響色譜柱柱效的因素。因此,為了提高色譜柱的柱效,保證液相色譜儀分析檢測(cè)的靈敏性,了解液相色譜柱的結(jié)構(gòu)性能尤為重要。
液相色譜柱通常分為正相柱和反相柱。正相柱大多以硅膠為柱,或是在硅膠表面鍵合-CN,-NH3等官能團(tuán)的鍵合相硅膠柱;反相柱填料主要以硅膠為基質(zhì),在其表面鍵合非極性的十八烷基官能團(tuán)(ODS)稱(chēng)為C18柱,其它常用的反相柱還有C8,C4,C2和苯基柱等。另外還有離子交換柱,GPC柱,聚合物填料柱等。
正相色譜柱的使用方法
1.新柱子可直接用流動(dòng)相。推薦先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速?zèng)_10倍柱體積,再根據(jù)流動(dòng)相選用極性相近的氯仿或二氯甲烷以相同的流速?zèng)_10倍柱體積,zui后換成流動(dòng)相;
2.正相使用時(shí),不宜分析含醛基、羰基的化合物,不可用于還原糖的分析;流動(dòng)相要*脫氣,并不得含有羰基化合物和過(guò)氧化物(質(zhì)量不好的乙醚、四氫呋喃含有少量);
3.任何時(shí)候更換流動(dòng)相時(shí)都要確保新流動(dòng)相與柱子原保存液可互溶。
反相色譜柱的使用方法
1.先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速?zèng)_10倍柱體積,再依次以相同的流速相同的用量用氯仿、異丙醇、甲醇、甲醇-水(50:50)沖柱子;
2.以0.5ml/min的流速用30倍柱體積的pH11.0的氫氧化鈉(LUNA)水溶液沖柱子(注意pH值切不可超過(guò)11.0),立即用水(0.5ml/min的流速,30倍柱體積)沖洗,再換成流動(dòng)相;
3.配制流動(dòng)相時(shí),應(yīng)各組分分別量取,比例較小的組分要精密量取,需調(diào)pH值時(shí)要精密到0.1;
4.反相條件下使用時(shí),要特別注意控制pH值范圍,pH值越低越有發(fā)生水解的危險(xiǎn),流動(dòng)相中水的比例越高當(dāng)然也越有發(fā)生水解的危險(xiǎn)。的pH范圍在pH3.0-7.0;
5.如果要使用的流動(dòng)相中還含有緩沖鹽類(lèi),建議在用分析流動(dòng)相之前,先用不含緩沖鹽的同比例流動(dòng)相過(guò)渡,這樣可避免緩沖鹽在分析柱內(nèi)的析出。